動物魚類蛋白質的測定方法
作者：祎鴻儀器 點擊率： 發布時間：2017-11-20 17:48:00
魚粉是一種重要的蛋白質原料，其安全性問題不能忽略。安全性主要體現在是否有藥物和有毒物質殘留，具體檢測的指標包括新鮮度、藥物殘留、衛生指標等。魚粉的新鮮度差，會嚴重降低魚粉的品質，甚至喪失飼用價值。筆者著重討論可標識魚粉新鮮度的揮發性鹽基氮（ＶＢＮ）含量的檢測。
ＶＢＮ是指動物性食物由于酶和細菌的作用，
在腐敗過程中，蛋白質分解而產生氨以及含氮胺類物質。此類物質具有揮發性，在堿性溶液中蒸出后，用標準酸液滴定從而計算含量。本試驗根據此原理，在半微量檢測方法的基礎上改良，使檢測更簡易、快捷。
１試劑
１．１１％氧化鎂混懸液
分析純氧化鎂１．０ｇ溶于１００ｍＬ蒸餾水中，振搖成混懸液。
１．２２％硼酸吸收液
分析純硼酸２ｇ溶于１００ｍＬ蒸餾水。
１．３０．１ｍｏｌ／Ｌ鹽酸標準液
吸取分析純鹽酸８．３ｍＬ，用蒸餾水定容至
１０００ｍＬ，用無水碳酸鈉標定。１．４０．０１ｍｌ／Ｌ鹽酸標準液
用０．１ｍｏｌ／Ｌ鹽酸標準溶液稀釋。
１．５混合指示劑
甲基紅０．１％乙醇溶液，溴甲酚綠０．５％乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存３個月以內。
２儀器
２．１全自動凱氏定氮儀２．２磁力攪拌器２．３離心機２．４消化管
２．５滴定管最小分度０．０１ｍＬ３分析步驟３．１樣品處理
稱取１０ｇ魚粉（精確至±０．０００１）于２５０ｍＬ錐形瓶中，加１００ｍＬ（Ｖ總）蒸餾水，于磁力攪拌器上攪拌３０ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ。
３．２蒸餾滴定
吸取２０．０ｍＬ２％硼酸吸收液于錐形瓶中，加混合指示劑２￣３滴，使ＫＤＮ－２Ｃ型定氮儀的冷凝管末端浸入此溶液。準確吸取１０．０ｍＬ（Ｖ分）上述樣品清液于消化管中，加少量蒸餾水沖洗，再加入１０ｍＬ１％的氧化鎂溶液，蒸餾至１５０ｍＬ（約
５ｍｉｎ）。吸收液立即用０．０１ｍｏｌ／Ｌ鹽酸標準溶液滴
定，溶液由藍綠色變為灰紅色為終點，同時做試劑空白。
４計算
揮發性鹽基氮（Ｗ）以每１００ｇ樣品含氮ｍｇ數表示。
Ｗ（ｍｇ／１００ｇ）＝Ｃ×（Ｖ１－Ｖ２）×１４ｍ×
（Ｖ分取／Ｖ總）×１００
Ｗ－樣品中揮發性鹽基氮的含量，ｍｇ／１００ｇ；Ｖ１－測定試樣所消耗鹽酸標準溶液體積，ｍＬ；Ｖ２－試劑空白消耗鹽酸標準溶液體積，ｍＬ；Ｃ－鹽酸標準溶液的實際濃度，ｍｏｌ／Ｌ；
１４－與１．００ｍＬ標準標準滴定溶液［ｃ（ＨＣｌ）＝１．０００ｍｏｌ／Ｌ］相當的氮的質量，ｍｇ；
檢測分析
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓ
ｍ－樣品質量，ｇ。
結果的表述：取兩次結果的平均值，保留３位有效數字。
溫度對ＶＢＮ含量的影響
磁力攪拌過程也要維持一定的溫度，溫度越高，ＶＢＮ含量越大，檢驗的誤差越大（表２）。
５允許差
相對誤差≤１０％。
溫度ＶＢＮ（ｍｇ／１００ｇ）
１０５１０８１２２１５４
２０℃２５℃３０℃３２℃
６影響因素
６．１時間
ＶＢＮ的檢測反映的是魚粉腐敗過程所產生的
氨以及胺類等堿性含氮物質，因此，離心后的樣液應馬上檢測。筆者以粗蛋白質含量為６５％的進口秘魯魚粉為例，對比時間對ＶＢＮ含量的影響（表１）。
時間
以上表明，磁力攪拌中控制溫度在２０￣２５℃最佳。
７其他
７．１魚粉執行質量標準（魚粉ＧＢＴ１９１６４－２００３）
主要技術參數
項目粗蛋白質／％
時間對ＶＢＮ含量的影響
ＶＢＮ（ｍｇ／１００ｇ）
１７５１５８１３３１１２１０６１０５
魚粉ＧＢＴ１９１６４－２００３
指標
特級品一級品二級品三級品
２ｈ１ｈ０．５ｈ１０ｍｉｎ５ｍｉｎ３ｍｉｎ
≥６５≥６０≥５５≥５０≤１５０
揮發性鹽基氮ＶＢＮ（ｍｇ／１００ｇ）≤１１０≤１３０≤１５０
７．２本檢測方法可推廣應用至其他的動物性蛋
以上表明，試液應在５ｍｉｎ以內進行測定。
白質飼料，例如血漿蛋白粉、血球蛋白粉，等等。
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