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測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法探討
作者：祎鴻儀器 點(diǎn)擊率： 發(fā)布時(shí)間：2017-11-09 17:13:00
蛋白質(zhì)含量的測(cè)定是目前生物化學(xué)中常用的一項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定。目前國(guó)內(nèi)外所采用的檢測(cè)方法主要有凱氏定氮法、紫外吸收法、雙縮脲分光光度法、考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）、Lowry法、二辛可酸比色法（BCA法）、熒光光度法、電流法、毛細(xì)管電泳分析法、羅丹明生物探針法以及高效光譜遙感技術(shù)分析法等。
蛋白質(zhì)測(cè)定方法有十幾種，在常用測(cè)定方法中，考馬斯亮藍(lán)法靈敏度最高，比紫外吸收法靈敏10～20倍。凱氏定氮法測(cè)定結(jié)果較為準(zhǔn)確，靈敏度高，故往往以該法測(cè)定的蛋白質(zhì)作為其他方法的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)。紫外吸收法和考馬斯亮藍(lán)法都是較為快速的測(cè)定方法。另外，不同方法下不同物質(zhì)對(duì)蛋白測(cè)定的干擾也不同。故對(duì)于不同樣品，應(yīng)選擇合適方法測(cè)定，如對(duì)測(cè)定結(jié)果要求較高，則往往需要結(jié)合多種方法測(cè)定，并分析測(cè)定結(jié)果，最終得出最準(zhǔn)確蛋白含量值。
食品中蛋白質(zhì)含量是衡量其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高低的一項(xiàng)重要指標(biāo)，因此有關(guān)蛋白質(zhì)的分析檢測(cè)對(duì)于人和動(dòng)物健康來(lái)說(shuō)尤為重要。目前所采用的蛋白質(zhì)含量檢測(cè)方法主要有凱氏定氮法、紫外吸收法、雙縮脲法、考馬斯亮藍(lán)法等，本文就實(shí)驗(yàn)室常用的幾種蛋白質(zhì)檢測(cè)方法及其特點(diǎn)分別作簡(jiǎn)單介紹。
每種測(cè)定法都有其優(yōu)勢(shì)，但也不可避免存在一定缺點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)綜合考慮各方面因素再選擇最佳使方法。實(shí)驗(yàn)對(duì)測(cè)定所要求的靈敏度和精確度、蛋白質(zhì)的性質(zhì)、溶液中存在的干擾物質(zhì)、測(cè)定所要花費(fèi)的時(shí)間等因素都會(huì)影響最終實(shí)驗(yàn)方法的選擇。
本文重點(diǎn)介紹凱氏定氮法
基本原理：凱氏定氮法包括微量定氮法和全量定氮法兩種方法，其測(cè)定蛋白質(zhì)含量的過程主要包括消化、蒸餾、吸收、滴定等步驟。
含氮有機(jī)物與濃硫酸共熱時(shí)，其中的碳、氫二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮?jiǎng)t轉(zhuǎn)變成氨，并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨，此過程稱為“消化”。濃堿可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，借水蒸汽將產(chǎn)生的氨蒸餾到硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，溶液中氫離子濃度降低。用標(biāo)準(zhǔn)無(wú)機(jī)酸滴定，直至恢復(fù)溶液中原來(lái)氫離子濃度為止，即可根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)酸的當(dāng)量數(shù)計(jì)算出待測(cè)物中的總氮量。蛋白質(zhì)中的氮含量一般為16%，據(jù)此推斷蛋白質(zhì)含量。
凱氏方法特點(diǎn)：該方法儀器裝置簡(jiǎn)單，試劑用量少且廉價(jià)易得。精密度、準(zhǔn)確度高，最低可檢出0.05mg氮，且樣品用量少。但操作較繁瑣費(fèi)時(shí)，不利于大批樣品的測(cè)定，且測(cè)定的結(jié)果只能是粗蛋白質(zhì)的含量，處理未知樣品時(shí)，其誤差還有變大的危險(xiǎn)。
應(yīng)用領(lǐng)域：適用于一切形態(tài)的食品與生物樣品。對(duì)于不溶和渾濁的樣品，其他許多方法不能進(jìn)行測(cè)定，凱氏定氮法是唯一可行的分析方法。
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